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人外周血PBMC的CD4+ T細(xì)胞磁珠分選及流式鑒定

更新時(shí)間:2025-05-26 14:17:38       點(diǎn)擊次數(shù):211

一、 人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的分離

1. 3ml抗凝血加入3ml 1×PBS進(jìn)行稀釋。

2. 在15ml離心管內(nèi)加入3ml淋巴細(xì)胞分離液,再在液面上方平鋪3ml稀釋過(guò)的抗凝血,常溫下,水平離心機(jī)600g,離心30min。

3. 吸取中間白膜層細(xì)胞,加入15ml離心管中,再加入10ml 1×PBS混勻,常溫下,1000rpm,離心10min,棄上清,每管加入2ml MACS緩沖液重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞數(shù)量,每個(gè)樣本不超過(guò)107個(gè)細(xì)胞。

4. 2000rpm,離心3min,棄上清。


二、 磁珠分選

1. 每管加入40ul MACS緩沖液重懸細(xì)胞,再加入10ul CD4+T Cell Biotin-Antibody Cocktail, human,混勻,4℃孵育5min。

2. 每管加入30ul MACS緩沖液,再加入20ul CD4+T Cell MicroBead Cocktail,human,混勻,4℃孵育10min。

3. 將分選柱置于磁力架上,加入3ml MACS緩沖液潤(rùn)洗柱子,待液體不再流出,更換新的離心管。

4. 將細(xì)胞懸液加入分選柱,待液體不再流出,加入3ml MACS緩沖液洗柱子,液體收集完畢,將離心管撤離后,再將分選柱撤下。

5. 將收集到的細(xì)胞懸液進(jìn)行離心,1500rpm,5min,去上清。


三、流式鑒定

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