凋亡檢測實(shí)驗(yàn)的目的:
掌上細(xì)胞凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征
通過實(shí)驗(yàn)通過用熒光探針對細(xì)胞進(jìn)行雙重標(biāo)記來檢測正常的活細(xì)胞,凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法。
1、取Falcon試管,按標(biāo)本順序編好陰性對照管和標(biāo)本管號。
2、使用冷的PBS緩沖液洗細(xì)胞兩次,再用1xBinding Buffer緩沖液制成1x106細(xì)胞/ml的懸液。試劑由優(yōu)寧維生物提供。
3、Falcon試管中加入100μl 細(xì)胞懸液。
4、按以下體積加入AnnexinV與核酸染料:
5、輕輕混勻,室溫(20°C ~25°C)避光處放置15分鐘。
6、使用Annexin V-Biotin試劑進(jìn)行檢測時:
1xBinding Buffer緩沖液洗細(xì)胞一次,去上清。
1xBinding Buffer緩沖液100µl溶解SAv-FITC試劑0.5µg,加入到細(xì)胞管中。
輕輕混勻。加入5µl PI,室溫(20-25°C)避光處放置15分鐘。
7、各試驗(yàn)管中分別加入1xBinding Buffer緩沖液400µl。1小時內(nèi)上流式細(xì)胞儀測定結(jié)果。
注意事項(xiàng):
1、誘導(dǎo)培養(yǎng) HL-60 細(xì)胞時間要準(zhǔn)確;
2、熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞時,由于熒光易碎滅,觀察時要盡量快。
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