一、膿毒癥模型構(gòu)建選擇依據(jù)

二、經(jīng)典膿毒癥模型構(gòu)建方法

1. 內(nèi)毒素（LPS）誘導(dǎo)的膿毒癥模型

適用：研究全身性炎癥風(fēng)暴、細(xì)胞因子釋放
步驟：

1. LPS準(zhǔn)備：溶解大腸桿菌O111:B4 LPS于無(wú)菌PBS（1-5 mg/mL）。

2. 注射劑量：

• 低劑量（1-5 mg/kg腹腔注射）：模擬輕度膿毒癥。

• 高劑量（10-20 mg/kg靜脈注射）：誘導(dǎo)休克樣反應(yīng)（6-24h內(nèi)死亡）。

3. 觀察指標(biāo)：

• 體溫下降（紅外測(cè)溫）、血清IL-6/TNF-α（ELISA）、肺/肝組織病理?yè)p傷。

注意事項(xiàng)：

• 不同小鼠品系對(duì)LPS敏感性差異大（C57BL/6較BALB/c更耐受）。

2. 活菌感染模型（以大腸桿菌為例）

適用：抗生素療效評(píng)估、免疫應(yīng)答研究
步驟：

1. 菌液制備：

• 培養(yǎng)大腸桿菌（ATCC 25922）至對(duì)數(shù)期，離心后重懸于PBS（調(diào)整至1×10^8-10^9 CFU/mL）。

2. 感染途徑：

• 腹腔注射：200 μL菌液（1×10^7-10^8 CFU/鼠），導(dǎo)致腹膜炎繼發(fā)敗血癥。

• 尾靜脈注射：100 μL菌液（1×10^6-10^7 CFU/鼠），模擬血源性感染。

3. 監(jiān)測(cè)：

• 每6小時(shí)記錄生存率，24h后取血/器官CFU計(jì)數(shù)。

關(guān)鍵點(diǎn)：

• 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定LD50（通常1×10^7 CFU腹腔注射致死率50%）。

3. 盲腸結(jié)扎穿孔（CLP）模型

適用：臨床相關(guān)性強(qiáng)的多微生物膿毒癥模型
手術(shù)步驟：

1. 麻醉與備皮：異fu烷麻醉，腹部剃毛消毒。

2. 開(kāi)腹：正中切口1-2 cm，暴露盲腸。

3. 結(jié)扎與穿孔：

• 結(jié)扎盲腸遠(yuǎn)端1/3（4-0絲線），避免腸系膜血管損傷。

• 21G針頭穿孔2次，擠出少量糞便。

4. 關(guān)腹：生理鹽水沖洗腹腔，縫合肌肉和皮膚。

5. 復(fù)蘇：皮下注射1 mL生理鹽水補(bǔ)液，保暖復(fù)蘇。

分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：

• 輕度：結(jié)扎1/2盲腸，單次穿孔（48h死亡率30-50%）。

• 重度：結(jié)扎3/4盲腸，兩次穿孔（24h死亡率>80%）。

注意事項(xiàng)：

• 術(shù)后需鎮(zhèn)痛（如布tuo啡諾），避免空腹手術(shù)。

三、表型驗(yàn)證與數(shù)據(jù)分析

四、注意事項(xiàng)與優(yōu)化策略

1. 動(dòng)物品系選擇：

• C57BL/6小鼠對(duì)炎癥耐受性強(qiáng)，BALB/c更易發(fā)生休克。

2. 感染劑量控制：

• 活菌模型需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)繪制生存曲線（如6h-72h）。

3. CLP手術(shù)技巧：

• 結(jié)扎位置和穿孔大小是影響重復(fù)性的關(guān)鍵因素。

4. 人道終點(diǎn)：

• 體重下降≥20%、無(wú)法自主進(jìn)食、呼吸窘迫時(shí)需安樂(lè)si。

五、模型局限性及替代方案

• 局限性：

• LPS模型不能模擬膿毒癥免疫抑制期。

• CLP模型操作者依賴性高。

• 替代方案：

• 結(jié)腸支架植入模型：將糞便封入可降解支架植入腹腔，模擬可控感染源